Detection of T-cell killing function

posted this at Jun 9, 2025 Updated at Dec 24, 2024

Summary

The assay of T-cell killing function can be applied to (1) immune cell function determination (2) clinical immunodiagnosis.

Operation method

Detection of T-cell killing function

Move

Protocol 1 Anti-CD3-induced T-cell killing assay Material $靶细胞： E B 病毒（E B V ) 转化的 B 淋巴母细胞（A T C C : # 1 6 1 2 ; 单元 8. 16) n/ R P M I -5完全培养基 lmCi/ml Na2 [51Cr] O 4 (51 Cr^ 3 0 0 mCi/mg； Amersham) ' T 细胞（效应性细胞）：单个核细胞、 T 细胞或 T 细胞亚群（单元 8 . 3 或单元 7. 2)，来自正常非免疫个体抗 CD3 抗体（IgG2a) ，由 OKT3 腹水或培养上清纯化（单元 1 . 5 ) 或商品化试剂 (Ortho Diagnostic 或 Becton Dickinson) 2 % (V /V ) Triton X-100 2 4 孔平底细胞培养板（Costar) Sorvall离心机及 HlOOOB转子（或替代品） 9 6 孔圆底细胞培养板（Costar) 1 . 在 2 4 孔板各孔中加入 5 X IO5E B V 转化的 B 细胞，补充 RPMI- 5 完全培养基至 I .9ml。再加入 0•Iml 51Cr (IOOjuCi) ， 37°C标记 18〜24h。 2 . 收集标记后的B 细胞并加入离心管中。加入 IOml R P M I -5完全培养基，室温， 250g 离心 5min，洗涤细胞。台盼蓝拒染法计数活细胞（附录 3 0 。用 R P M I -5完全培养基，调整浓度至5X 103个细胞/50/^1 (即 I X l O 5个细胞/ml)。 3•从IX lO 5个细胞/IOOmI 开始，用 R P M I -5完全培养基，将效应性 T 细胞进行至少 4 个浓度的系列稀释，起始效应细胞：靶细胞（effector : target， E : T ) 为 20 : 1。 4•从4Mg/m l 开始，用 R P M I -5完全培养基，将抗 C D 3 抗体进行至少5 个浓度的4 倍系列稀释。 5 . 在 9 6 孔板各孔中，加入 50^1放射标记的靶细胞、 50^1不同稀释度的抗C D 3 抗体和 I O O W 不同稀释度的效应细胞，各组设 3 复孔。自发释放对照组只加入靶细胞（不加抗体及效应细胞）。使用单个核细胞进行实验时，应设置含靶细胞和效应细胞的对照组（不加抗体），即 N K 细胞杀伤活性对照组。在另一块 9 6 孔板中，设置最大释放对照组，其中加入 5 \ 1 0 3标记后靶细胞和 150/^12%1^1〇111-100，也设 3 复孔$

Common Problems

This experiment is from "Compendium Immunology Laboratory Guide" by J.E. Colligan et al, translated by Xuitao Cao et al.

For more product details, please visit Aladdin Scientific website.

https://www.aladdinsci.com/

Categories: Protocols

Explore topics: Immunological experiments

Was this article helpful? 0 out found this helpful