🌎 Ship to: United States
Toggle Nav
Cart
Search
Same-day shipping on all in-stock items.
Advanced Search
Quick Order SDS CoA
Menu
Account
Settings
྾
224,000+ research products · Triple ISO certified · COA & SDS available for every product · Same-day shipping on in-stock items

Detection of NK/LAK cell killing activity

posted this at Jun 9, 2025 Updated at Dec 24, 2024
Summary

Author: J.E. Colligan et al, Translator: Xuitao Cao et al, This experiment is from "Compendium Immunology Laboratory Guide".

Operation method

Detection of NK/LAK cell-killing activity

Move

Basic Scheme 51C r Release Assay for NK/LA K Cell Killing Activity Materials 效应细胞：自然杀伤细胞（natural killer， N K ) (单元8. 6)、淋巴因子活化的杀伤 细 胞 （lymphokine-activated killer， L A K ) ，或外周 P B M C (单元 8. 1 ，按照附 录 1 ，采用非连续Ficoll-Hypaque密度梯度离心法分离） V R P M I -I O 完全培养基，用 于 N K 细胞培养 51C r 标记的靶细胞，用 R P M I -I O 调整浓度为5 X 104个细胞/ml (见辅助方案） 含 5 % (VyV) TritonX-IOO 的 PBS IOml圆底带盖聚丙烯塑料试管 9 6 孔圆底细胞培养板（Costar) 8 道 移 液 器 （如 Titertek、 ICN Biomedicals) Sorvall R T 6000离心机及HlOOOB转 子 （或替代品） 7 液闪和配套试管 1 . 台盼蓝拒染法测定效应细胞的活力（附 录 3 0 。将细胞悬液加入I O m l 圆底带盖聚丙 烯塑料试管中，用 R P M I -I O 培 养 基 调 整 到 合 适 浓 度 ，以 满 足 效 应 细 胞 ：靶细胞 (E : T )起始比率所需。如起始E •• T 为 5 0 : 1 时 （对于;P B M C )，效应细胞的浓度应 为 2. 5X 106个细胞/m l ; 起 始 E : T 为 6 : 1 时 （对 于 L A K 细胞），效应细胞的浓度 为 3. 125 X I O 5个细胞/ml (表 8. 14. 1)。2 3 表 8.14.1 4h 51Cr释放法检测健康志愿者PBMC来源的NK细胞和LAK细胞的杀伤活性: 靶细胞 不同效/ 靶 比 时 的 杀 伤 百 分 率 （均数士SD) 杀伤单位 杀伤单位 50 : 1 25 J 1 12 ： 1 undefined1 undefined1 1. 5 •• 1 0. 75 : I (LU2 〇/107个细胞) 范围b NKc LAKd 45±16 30士14 20士9 11±6 57±14 44士13 154±95 30±12 18±9 1926±1244 53〜 301 140 669〜 3736 134 a. 缩 写 ： LAK，淋巴因子活化的杀伤细胞； NK，自然杀伤细胞； LU2 。， 20%裂解时的 裂 解 单 位 ； n , 例 数; PBMC，外周血单个核细胞； SD，标准差。 b . 正 常 50%〜80%范围。 c . 新鲜分离的PBMC对 K562靶细胞的杀伤活性。 d. PBMC经 6000U/mlIL-2体 外 培 养3d后 ，对 Daudi细胞的杀伤活性。 2 . 轻轻混匀效应细胞，在 9 6 孔 板 B 行 的 第 1〜3 孔中各加入200^1效 应 细 胞 悬 液 （图 8.14.1)。同样将其他待测效应细胞悬液加入到C 〜H 行 的 第 1〜3 孔中。一 块 9 6 孔 板最多可同时检测7 个样品。 3 . 用 8 道 移 液 器 ，在 B 〜 H 行 第 4 〜 1 2 孔 中 各 加 入 100/xl R P M I - I O 培 养 基 （图 8. 14. 1)。从 B 〜H 行 第 1 列各孔中吸取100/xl液体加到B 〜H 行 第 4 列对应各孔中， 混匀。然后将第4 列中的液体各取IOOiUd加 到 第 7 列的对应孔中，混匀。继续将第7 列各孔中的液体吸取IOOm I加入到第1〇列相应的各孔中，混匀。最后将第1〇列各 孔中的液体吸弃100/^1。剩下的两列复孔重复上述操作，即将第2 列各孔中的液体依 次稀释到第5、 8 和 1 1 列 ；第 3 列各孔中的液体稀释到第6、 9 和 1 2 列
4 . 用 R P M I -10将51C r 标记的靶细胞调整为5 X IO4个细胞/m l ，在 A 〜H 行各孔中加入 IOOiU l靶细胞悬液。然 后 在 A 行 第 1〜6 孔 中 加 入 100M1 R P M I -10培 养 基 （自发释放 对照组）；在 八 行 第 7〜 12孔 中 加 入 10(^15%丁 出 〇11义-100(最大释放对照组）
5 . 室温， 200g•离心3min，缓慢减速。将 培 养 板 置 37°C ， 5 % C 0 2细胞培养箱中培养 4h 。培养时，避免将培养板互相叠放。 6 . 用 8 道移液器小心吸取50M1或 IOOm I培养上清加入相应的7 计 数 管 中 （此时也可采 用自动收集系统）。 7 . 用 y 液闪仪检测各样品的51C r 放 射 值 （包括对照孔和实验孔）。根 据 公 式 计 算 N K / L A K 细胞特异杀伤百分率。 杀伤率％= l〇〇X : 实验孔平均c p m — 自发释放孔平均cpm '最大释放孔平均cpm— 自发释放孔平均cpm 8 . 为 比 较 不 同 效 应 细 胞 及 不 同 E : T 条 件 下 的 杀 伤 活 性 ，结果可用杀伤单位表示 (L U ; 如 表 8. 14.2)。一 个 L U 代 表 杀 伤 一 定 百 分 比 （如 2 0 % ) 标准靶细胞所需的 效应细胞数量。 表 8.14. 2 头颈部肿瘤患者经IL -2治疗后，外 周 血N K 细 胞 和L A K 细胞杀伤活性的变化a，b 细胞杀伤活性（LU2Q /107个细胞） 例数 P 值 IL-2治疗前 IL-2治疗后 NK (杀伤 K562) c 100士12 158士12 26 0. 005 LAK (杀伤 DaudDd 1000士130 1995士150 23 0.0006 LAK (杀伤 SCCHN)d 316士23 631士50 20 0. 015 a. 缩写： IL-2，白细胞介素2; LAK，淋巴因子活化的杀伤细胞； NK，自然杀伤细胞； P ，差异显著性水平; SCCHN，头颈部鳞状上皮癌。 b•数据摘自 Whiteside 等， 1993。 c. 新鲜分离PBMC的杀伤活性。 d. PBMC经 6000U/ml IL-2体外培养3d 后的杀伤活性


For more product details, please visit Aladdin Scientific website.

https://www.aladdinsci.com/

Categories: Protocols
Explore topics: Immunological experiments 
Was this article helpful? 0 out found this helpful
Related Articles
Categories
We use cookies to ensure the website functions properly and, where permitted, to improve your experience. You can manage your preferences at any time in Settings. Learn more in our Cookie Policy.

Shall we send you a message when we have discounts available?

Remind me later

Thank you! Please check your email inbox to confirm.

Oops! Notifications are disabled.

Privacy Policy Website Terms of Use Return policy Terms and Conditions of Sale Cookie Policy Sales Policy
Products are supplied to verified businesses/institutions and qualified professionals for R&D use only. Not for use in humans, animals, diagnosis, or therapy.
Copyright © 2023-present Aladdin Scientific Corp . All rights reserved.